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淺析:SYSY多克隆抗體,單克隆抗體或重組抗體

發布者:艾美捷科技    發布時間:2022-08-25     
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    簡介

    多克隆抗體

    單克隆抗體

    重組抗體

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    參考文獻


簡介

幾乎沒有例外,哺乳動物IgG型抗體由兩條完全相同的重鏈和兩條完全相同的輕鏈通過雙硫鍵連接在一起。每條鏈都包含一個物種特異的恒定區和一個可變序列區,此可變序列決定了抗原結合特性,例如親和性和特異性(Amzel and Poljak, 1979)(圖1)。

用于科學研究的抗體制劑通常是多克隆抗體或者單克隆抗體。


SySy多克隆抗體

多克隆抗體由抗體分子混合物組成,由于其可變序列區的不同,因此它們的抗原結合特性也不同(圖2)。多克隆抗體通常從免疫動物的血清中獲得(Benner et al., 1981; Wootla et al., 2014)。

在動物免疫之后,激活的B細胞分化為漿細胞而最終生成大量可溶抗體。每一個高度特化的細胞都攜帶著分泌抗體的遺傳信息(Benner et al., 1981; Wootla et al., 2014)。

為了收獲最大量含有抗體的血清,宿主動物通常被犧牲,因此包含特定抗體遺傳信息的漿細胞也會丟失。

因此,最終獲得的抗血清是非常有限的資源。新的抗血清只能通過重新免疫更多動物獲得。無論新材料驗證的有多徹底,這樣都不可避免地會導致一些批次間差異。


SySy單克隆抗體

單克隆抗體包括完全相同的抗體分子,它們分享相同的抗原識別特性(圖3)。

在1975年,雜交瘤技術被引進(Koehler and Milstein, 1975, Koehler and Mistein, 1976)。在這種方法中,抗體產出B細胞跟一個骨髓瘤細胞株融合在一起,從而生成所謂的可無限增殖的雜交瘤細胞。每個雜交瘤細胞克隆生成具有相同特性的同一抗體。這種技術的優點非常明顯。新批次的抗血清不再需要每次從頭開始進行廣泛的表征和驗證。實驗方案也不再需要費力地去適應不斷改變的抗體特性。即使隨著時間的推移,科學界積累的驗證數據依然可以保持它們的有效性。這樣也使更多研究試劑具有更好的特性和價值。

然而,由雜交瘤技術生成的單克隆抗體仍然有一些限制。它們會經歷遺傳漂變,從而導致在特異性和親和性上一些不期望的變化??傊?,單克隆抗體的遺傳信息是未知的,并且抗體特性的細微變化通過周密的細胞庫已被最小化。某些雜交瘤細胞已被證明是不穩定的并且已被停止用來表達抗體。

 

sysy多克隆抗體

sysy單克隆抗體

圖2:多克隆抗體是來自于相同物種的抗體分子的混合物,它們針對同一目標,但其可變的目標識別序列不同。圖3:單克隆抗體是完全相同的抗體分子,它們分享同樣的恒定區和可變序列。

 


SySy重組抗體

重組抗體是通過使用已知的抗體編碼基因,離體生成的單克隆抗體。一個抗體輕鏈和重鏈的編碼序列可通過例如雜交瘤測序獲得。序列可被克隆為表達載體,隨后被轉染入哺乳動物宿主細胞株進行抗體表達。最后穩定的轉染細胞克隆可被生成,并且表達可被調整和優化(Kuhnert and Reinhart, 2016)。

一旦抗體被克隆,就有可能對其進行修飾??勺冃蛄锌杀煌蛔儊砀淖兘Y合特性或者親和性。來自一個物種的恒定區可被來自另一物種的恒定序列代替,從而產生了嵌合重組抗體(Sahagan et al., 1986; Zalutsky et al., 1996)(圖4)。這些通過基因工程改造的嵌合重組抗體保留了原抗體克隆的所有抗原識別特征(圖5)。

 

sysy嵌合重組抗體

圖4:一個嵌合重組抗體是通過將單克隆抗體的恒定區與其他物種的恒定序列交換而獲得的。

 

與單克隆抗體相比,重組抗體有許多優勢

重組抗體是在高度定義和控制的條件下生成的,具有最小批次間差異的無限資源。從細胞培養上清中純化而來,所以不需要犧牲動物。序列是已知的,所以抗體不會由于遺傳漂變而變化。相反的是,抗體工程有了更多的選擇使一個抗體能去適應特定實驗要求。Synaptic Systems可提供越來越多樣的嵌合重組抗體,其恒定區來源于兔,豚鼠,大鼠,人類及雞。他們都來自于我們表現優良的小鼠或兔單克隆抗體,并且可與常規物種特定二級抗體結合。Synaptic Systems 重組抗體是非常有價值,可靠的具有卓越表現的科研工具。

 

IHC 大鼠腦IHC-P 小鼠腦ICC 神經元

IHC 大鼠腦 sysy嵌合重組抗體

IHC-P 小鼠腦sysy嵌合重組抗體

ICC 神經元sysy嵌合重組抗體

圖5: 對比實驗的代表性圖片表明,嵌合重組抗體保留了原單克隆抗體的所有抗原結合特性。IHC圖表顯示了用單克隆小鼠抗IBA1抗體 234 011和來源于IBA1抗體 234 011的嵌合重組 雞抗IBA1抗體 234 009 而獲得的大鼠腦切片的免疫染色(IBA1 = 紅色, DAPI = 藍色)。IHC-P 圖表顯示了利用單克隆小鼠抗VGLUT 2抗體135 421 和新興的嵌合重組豚鼠抗VGLUT 2抗體135 418的小鼠腦切片的間接免疫染色(VGLUT 2 = 棕色, haematoxylin = 藍色)。在 ICC 實驗中, c-Fos 抗體 226 017 (大鼠單克隆抗體)和c-Fos 抗體 226 008 (兔重組抗體) 被用來對大鼠海馬體神經細胞進行間接免疫染色(c-Fos = 紅色, MAP 2 188 002 (多克隆兔抗血清) 和 MAP 2 188 011 (單克隆小鼠純化IgG) = 綠色, DAPI = 藍色)。

 


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產品貨號產品名稱應用規格
218 008Abeta 38/40/42/43, rabbit, monoclonal, recombinant IgGIHC IHC-P50 ug
218 308Abeta 38/40/42/43, Guinea pig, monoclonal, recombinant IgGIHC IHC-P50 ug
N1582ALFA, mouse, monoclonal, recombinant IgGWB ICC100 ug
N1583ALFA, rabbit, monoclonal, recombinant IgGWB ICC100 ug
N1584ALFA, Guinea pig, monoclonal, recombinant IgGWB ICC100 ug
302 008α-Tubulin, rabbit, monoclonal, recombinant IgGWB ICC IHC100 ug
302 308α-Tubulin, Guinea pig, monoclonal, recombinant IgGWB ICC IHC IHC-P50 ug
141 118Bassoon, rabbit, monoclonal, recombinant IgGWB ICC IHC IHC-P50 ug
251 008β-Actin, rabbit, monoclonal, recombinant IgGWB ICC50 ug
226 008c-Fos, rabbit, monoclonal, recombinant IgGWB ICC IHC IHC-P iDISCO50 ug
226 308c-Fos, Guinea pig, monoclonal, recombinant IgGWB ICC IHC IHC-P50 ug
343 008c-Myc, rabbit, monoclonal, recombinant IgGWB IP ICC IHC IHC-P100 ug
214 008Calbindin D28k, rabbit, monoclonal, recombinant IgGWB ICC IHC IHC-P50 ug
214 108Calretinin, rabbit, monoclonal, recombinant IgGWB ICC IHC50 ug
258 008Cannabinoid receptor CB1-R, rabbit, monoclonal, recombinant IgG K.O.ICC IHC IHC-P50 ug

 

參考文獻

Amzel and Poljak, 1979: Three-dimensional structure of immunoglobulins. PMID: 89832

Benner et al. 1981: Immunoglobulin isotype expression. II. Frequency analysis in mitogen-reactive B cells. PMID: 6975718

Wootla et al., 2014: Polyclonal and monoclonal antibodies in clinic. PMID: 24037837

Koehler and Milstein, 1975: Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. PMID: 1172191

Koehler and Milstein, 1976: Derivation of specific antibody-producing tissue culture and tumor lines by cell fusion. PMID: 825377

Kuhnert and Reinhart, 2016: Advances in recombinant antibody manufacturing. PMID: 26936774

Shahagan et al., 1986: A genetically engineered murine/human chimeric antibody retains specificity for human tumor-associated antigen. PMID: 3088107

Zalutsky et al., 1996: Chimeric anti-tenascin antibody 81C6: increased tumor localization compared with its murine parent. PMID: 8832699

 

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